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双标签测序

准确的样本拆分

唯一双标签序列可降低每个样本的成本,与其他标记策略相比,其测序文库的准确性最高

Dual Index Sequencing

了解双标签测序

与其他标记策略相比,唯一双标签序列能增加每次运行检测的样本数量,降低每个样本的成本。只需要1个唯一双标签序列板,就可以混合96个样本。

双标签测序策略

除唯一双标签序列外,另一个双标签测序策略是使用组合双标签。为多重分析制备文库时,我们推荐使用唯一双标签序列。对于添加了双标签的文库,测序运行包含2个额外的read。额外的read能让运行后分析软件以更高的准确性进行样本拆分。

唯一双标签序列

为防止孔板中形成重复序列,唯一双标签序列在样本的两端都使用唯一的标记。

一个唯一双标签板可以混合96个样本,需要使用96个唯一标签1(i7)接头和96个唯一标签2(i5)接头。

组合双标签

使用组合双标签时,孔板的行和列之间的序列会重复。

标签仅限于8个独特双标签对的组合,因此标签接头会共享一些序列。大部分文库会共享i7或i5端的序列。

为什么使用唯一双标签序列?

唯一双标签序列的优点包括:

  • 更高效的多重分析
  • 与组合双标签或单标签序列相比,它可在单次测序运行中引入更多标签,从而降低每个样本的成本
  • 高纯度,生产条件符合药品生产质量管理规范(GMP)
  • 考虑了色彩平衡的改良设计
  • 通过过滤跳跃read来减少标签跳跃

深入了解唯一双标签序列如何确保Illumina测序系统的高准确性。

查看公告
Comparison of UD and CD Index Adapters

唯一双标签和组合双标签接头的比较

一个唯一双标签板可以混合96个样本。相反,组合双标签仅限于8个独特双标签对的组合标签。

Illumina标签接头说明

Nextera文库制备使用经改造的转座酶对基因组DNA进行酶切法片段化,这个过程可在一步内将DNA片段化然后用接头序列标记DNA。然后,含有少量循环数的PCR步骤会使用接头来扩增DNA插入片段。PCR步骤会在DNA的两端添加标签接头序列,以便在Illumina测序平台上进行混合文库的双标签测序。这些标签接头不能用于其他文库制备方法。

TruSeq文库制备使用嵌入接头的标签来实现高通量的处理和应用的灵活性。我们在这种通用甲基化接头设计的基础上,在最初的连接步骤中添加了标签序列。同一个TruSeq试剂盒可制备能在所有Illumina测序仪上进行单端测序、双端测序和多重测序的样本。RNA和DNA试剂盒还包含带有唯一标签序列的接头,该接头会在文库构建开始时连接至样本片段。这允许将样本混合,然后在下游分析中单独进行识别。这些标签通常可用于其他文库制备方法。

针对关键应用推荐的标签接头和文库制备试剂盒

应用 文库制备试剂盒 推荐的标签解决方案
全基因组测序 Illumina DNP Prep IDT for Illumina UD Indexes
RNA测序 Illumina Stranded mRNA Prep
Illumina Stranded Total RNA Prep
IDT for Illumina – RNA
扩增子测序 AmpliSeq for Illumina Panels AmpliSeq UD Indexes for Illumina ( ≤ 24个样本)
AmpliSeq UD Indexes for Illumina ( > 24个样本)
靶向DNA富集 Illumina DNA Prep with Enrichment IDT for Illumina Nextera UD Indexes

Frequently Purchased Together

向专家咨询如何充分利用Illumina Library Prep

我们会满足您的需求并给予建议。

我应该使用唯一双标签序列还是唯一分子标记?

唯一双标签序列在多重分析时很有用,可以降低由于标签跳跃造成的样本错配。在使用具有图案化流动槽的仪器(例如NovaSeq 6000系统)时,UDI特别有效。

唯一分子标记可以降低假阳性变异检出的概率,同时能提高变异检测的灵敏度。它们可用于去除DNA和cDNA中的PCR重复,以及低频变异的检测(例如高度多重的CNV检测)。深入了解 唯一分子标记

单标签与双标签

通常而言,双标签是更好的方法。双标签测序确实需要额外的循环,但是试剂盒提供了足够的试剂来进行额外的循环。如有以下情况,可选择进行单标签测序:

  • 仪器不支持双标签测序(HiSeq 1000/1500系统)
  • read需要更长一些(碱基更多)
  • 日程安排没有额外的1-2小时来运行第二个标签
NovaSeq 6000

NovaSeq 6000系统

NovaSeq 6000系统将最新的高性能成像与Illumina图案化流动槽技术结合在一起。经过升级的流动槽缩小了纳米孔之间的间隔,大大提高了簇密度和数据产出。

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双标签测序相关资源

Illumina接头序列

本文档包含几种Illumina文库制备试剂盒使用的Illumina接头的寡核苷酸序列。

标签测序指南

深入了解在Illumina仪器上进行的单标签测序和双标签测序。

Illumina接头混合指南

本文档提供了在混合标签文库时,有关优化所有Illumina系统色彩平衡的建议。

Illumina接头技术支持

查找有用的IDT for Illumina唯一双标签序列相关资源和支持信息。